Innhold
- Fortynnende prøver, plating og inkubasjon
- Manuell telling
- Automatisk telling
- Gjør telling mer komplisert
En av de klassiske måtene å bestemme konsentrasjonen av mikrober i en prøve er å fortynne prøven, dyrke mikrober på plater og telle koloniene. De belagte mikrober vokser fra en kolonidannende enhet som består av en eller flere celler til en synlig koloni som kan sees og telles. Bakterier er den vanligste mikroben å vurdere ved bruk av platetelling. Kolonitelling brukes til å oppdage og telle mikrober i jord, vann og mat. Protokoller for telling av kolonier understreker en nøyaktig og metodisk tilnærming.
Fortynnende prøver, plating og inkubasjon
Hvis du bare smører en mikrobeprøve på en agarplate, vil du se så mange kolonidannende enheter at de enkelte koloniene vil blandes sammen, noe som gjør dem umulige å telle. For å løse dette problemet, bland prøven i et flytende medium, ta en liten mengde av den blandingen og fortynn den ytterligere. Gjenta denne prosessen seks til 10 ganger. Spred den endelige fortynningen på en agarplate og inkuber den i fire til syv dager før du teller koloniene.
Manuell telling
Det viktigste trikset i å telle kolonier er å telle hver koloniprikk en gang. En tilnærming er å sette petriskålen på en rutenettbakgrunn og telle koloniene i hver rutenettcelle, bevege seg i et metodisk mønster gjennom alle cellene. Å merke telle kolonier på baksiden av petriskålen kan også være en nyttig tilnærming. Generelt sett må du telle minst tre plater; bare bruk tallerkener som inneholder 30 til 300 kolonier for å gjøre robuste slutninger, foreslår Microbiology Network, et firma som tilbyr konsulenttjenester til laboratorier og produsenter. Plater med kolonier som er for mange til å telle eller med for få kolonier, må omplates fra en ny fortynning.
Automatisk telling
Menneskelig feil øker tiden involvert i å telle kolonier manuelt. For å forbedre både nøyaktighet og effektivitet, plasser Petri-parabolen i en automatisk tellende enhet. Automatiserte kolonitellere tar et bilde av parabolen, skiller ut koloniene fra bakgrunnen og bruker deretter en algoritme for å telle koloniene på tallerkenen. Algoritmene kan ha vanskeligheter med å skille kolonier når to eller flere kolonier berører kantene, så dette er et område med kontinuerlig programvareutvikling.
Gjør telling mer komplisert
Nøyaktigheten av å beregne mikrobetetthet fra kolonitelling har noen begrensninger. Kolonidannende enheter kan være en enkelt celle, en kjede av celler eller en hel klump av celler. Antagelsen er at en koloni representerer en celle, slik at konsentrasjoner beregnet ut fra kolonitelling kan være lave. Ulike mikrober trenger forskjellige vekstbetingelser, og koloniene på platen representerer bare de mikrober som trives på det vekstmediet under disse inkubasjonsbetingelsene. I tillegg registrerer ikke kolonitelling døde celler, noe som er viktig når du trenger konsentrasjonen av celler i den opprinnelige prøven.