Innhold
Bakterier dyrkes i petriskåler på et fast medium kjent som bakteriell agar, der det dannes høye, sirkulære kolonier. I motsetning til en individuell bakteriecelle, er en koloni en gruppe bakterier som er store nok til å være synlige for det blotte øye. Bakterievekst kan måles ved enkel observasjon av hvor mange kolonier som er til stede; Imidlertid inkluderer mer kvantitative metoder bruken av et tellekammer, eller oftere levedyktige platetellinger. Sistnevnte brukes hyppigst da den også gir kvalitativ informasjon, for eksempel effekten av varierende vekstforhold. Siden det kan være milliarder av bakterier i en petriskål, må måling først fortynne prøven slik at det er mulig å telle antall kolonier.
Tilsett 10 mikroliter av den startende bakteriekulturen i et prøverør til 90 mikroliter fortynningsmedium. Lukk lokket på røret tett og virvel forsiktig for å få en homogen blanding. Nå er prøven en tidel av den opprinnelige konsentrasjonen.
Overfør 10 mikroliter av denne nye prøven til et nytt prøverør som inneholder 90 mikroliter fortynningsmedium, bland det igjen. Nok en gang vil resultatet bli prøven fortynnet ytterligere - nå vil den være en hundreledel av den opprinnelige konsentrasjonen. Gjenta dette flere ganger, til den originale prøven er blitt fortynnet mellom 104 og 1010 ganger. Forsikre deg om at hvert rør er merket med riktig fortynning, for eksempel 10-1, 10-2 og så videre.
Doser 10 mikroliter av den siste fortynningen som er fullført på agarplaten. Distribuer bakterieoppløsningen over hele overflaten av agarplaten ved å bruke spredningskanten. Gjenta dette for to plater til. Det er også vanlig å utføre disse trinnene med andre nivåer av fortynning for sammenligning. Sørg for å merke bunnene på platene. Sett på lokkene på hver plate og la agarplatene tørke i flere minutter, enten på en laboratoriebenk under en flamme, eller i en inkubator. Plasser platene i inkubatoren som skal settes til passende temperatur for bakteriestammen. La det vokse i 12 til 16 timer.
Kolonier skal være synlige etter 16 timer; Noen genetiske modifikasjoner kan imidlertid kreve lengre tid (for eksempel fargeutvikling). Når kolonier er observerbare, ta ut platene og finn dem som har mellom 30 og 300 kolonier. Bruk en permanent markør og plasser en prikk på bunnen av petriskålen - siden med agaren, ikke lokket - uansett hvor en koloni er synlig gjennom agaren. Telle hver markørprikk. Gjenta for hver tallerken.
For å måle mengden bakterier i startkulturen for dette eksperimentet, må fortynningen reverseres i beregningene to steder. For det første, når du tok en mikroliter fra prøverøret for å legge i petriskålen, tok du en tidel av den fortynnede prøven, så du må multiplisere alt med 10 for å snu det. I tillegg, hvis fortynningsfaktoren i prøverøret var for eksempel 10-7 , så må antall kolonier multipliseres med 107 for å reversere fortynningseffekten. Bare fjern det negative tegnet fra eksponenten i beregningene. Bruk formelen:
× 10 × = Antall kolonidannende enheter (CFU) per milliliter startkultur. Dette er bakterieveksten i petriskålene dine.