Innhold
Høy ytelse væskekromatografi er en teknikk for laboratorieanalyse av en blanding. Det er en effektiv type kromatografi som bruker høyt trykk, snarere enn bare tyngdekraft, for å drive en prøve av en blanding gjennom en søyle. En prøve blir injisert, deretter hjelper en pumpe som inneholder høye trykkmengder til å bevege prøven langs en pakket søyle, hvor den blir separert i individuelle komponenter. Denne separasjonen blir deretter analysert av en detektor for å gi resultater.
Injeksjonssted
For å bli injisert i en HPLC, må en prøve først oppløses i et polart flytende løsningsmiddel, fortrinnsvis et med kjente HPLC-spektre, slik at dets data kan skilles fra prøvene. Væskeoppløsningen som inneholder prøven plasseres i instrumentet og sendes inn i kolonnen. Den faktiske plasseringen av injeksjonsstedet avhenger av instrumentets merke. I de fleste tilfeller er injeksjonsprosessen automatisert, men i noen tilfeller må en laboratorieinjiserer prøven ved hjelp av en liten sprøytenål.
Pumpekomponent
Pumpekomponenten til HPLC-enheten er nødvendig fordi den gir trykket som driver prøven gjennom kolonnen. Pumpestyrken varierer, men en kraftig kan gi et trykk på opptil 6000 psi, eller pund per kvadrat tomme, som påføres etter at prøven er injisert. Dette gjør at prøven kan passere gjennom kolonnen raskere og mer effektivt enn hvis den skulle dryppe gjennom å bruke bare tyngdekraften.
Kolonnebeskrivelse
Den økte hastigheten til en prøve som føres gjennom kolonnen av en pumpe tillater bruk av en annen type kolonne enn de som ble brukt i enkel væskekromatografi. Pakkematerialet i kolonnen kan ha en mye mindre partikkelstørrelse, noe som øker overflatearealet og derfor hjelper interaksjoner mellom prøven og kolonnen. De fleste HPLC-kolonner fungerer gjennom polaritet. Prøven blir oppløst i et polart løsningsmiddel, og kolonnen består av stort sett ikke-polare hydrokarboner. De polare delene av prøvemolekylet passerer veldig raskt gjennom kolonnen fordi de hovedsakelig samhandler med løsningsmidlet, mens prøvene ikke-polare komponenter surrer i kolonnen, og danner svake interaksjoner med kolonnekomponentene. Derfor kommer prøvekomponentene fra kolonnen i rekkefølge fra mest polært til mest ikke-polært.
Detektorfunksjon
Detektorer varierer også avhengig av hvilken type HPLC-instrument som brukes. Imidlertid fungerer de fleste på samme grunnleggende måte. En kilde med ultrafiolett lys skinner på de adskilte prøvekomponentene når de kommer ut av kolonnen. De fleste organiske forbindelser tar opp en viss mengde lys, så når de går forbi den påførte lysstrålen, kan en detektor plukke opp hvor mye lys som absorberes. Detektoren registrerer også lagringstiden for komponenter basert på rekkefølgen de kommer ut av kolonnen. Denne utgangen kan deretter analyseres basert på toppområdet for å bestemme den nøyaktige arten av prøvenes komponenter.