Innhold
Beregning av titer for et virus er en komplisert måte å si at en forsker teller antall virus i en bestemt prøve. For å beregne virustitere infiserer forskere plater med voksende bakterier med virusløsninger i forskjellige konsentrasjoner og finner ut antall virus i den opprinnelige løsningen ved å telle bakteriene som har dødd på grunn av virusinfeksjonen.
Seriefortynninger
Ta på hansker, fyll 10 kulturrør med 9 ml buljong og merk dem “10 ^ -1,” “10 ^ -2”, “10 ^ -3,” og så videre til “10 ^ -10.” Disse rørene vil bli brukt til virale seriefortynninger som brukes til å beregne fagtiter. Siden virus kan vokse til utrolig høye konsentrasjoner, må du fortynne dem for å telle dem effektivt. Hvert rør representerer en ti ganger fortynning av viruset.
Ta 1 ml av viruskulturen du vil beregne fagtiter for, og overfør den til røret med tittelen “10 ^ -1” med en pipette. Bland røret godt. Dette er din første ti ganger fortynning.
Ta 1 ml av blandet kultur fra røret merket “10 ^ -1” og overfør det med en ny pipette til neste rør, merket “10 ^ -2.” Bland dette røret også.
Fortsett dette mønsteret for å lage en seriefortynningsserie. Du ender opp med 9 rør på 9 ml og 1 rør på 10 ml. De virale belastningene i rørene dine vil bli fortynnet hvor som helst fra 10 ganger (ditt første rør) eller 100 ganger (ditt andre rør) til ti milliarder ganger (ditt endelige rør).
Klargjøring av plater for beregning av titer
Ta 10 rør med trypton myk agar og 10 Petri-plater og merk dem for å samsvare med seriefortynningsrørene.
Løsne lokkene slik at de ikke dukker opp i varmen, og legg deretter agarrørene i et beger med kokende vann. Dette vil smelte agaren slik at du kan helle den i Petri-plater.
Overfør rørene til et varmtvannsbad med minimum 45 grader celsius. Dette vil sikre at agaren din ikke stivner i rørene før du har en sjanse til å helle den i en petriskål.
Legg to dråper bakteriekultur i agaren din og bland den forsiktig. Dette er bakteriene som blir drept, slik at du kan telle antall viruspartikler i en bestemt løsning.
Tilsett 1 ml av hver seriefortynning til det tilsvarende agarrøret mens rørene fortsatt er i varmtvannsbadet. For eksempel bør 1 ml av din 10 ^ -1 seriefortynning gå i agarrøret merket "10 ^ -1."
Bland hvert rør og hell deretter hvert rør i Petri-platen med tilhørende etikett. Dette vil skape et tynt lag agar som er blitt inokulert med bakterier og virus i hver plate. La platene vokse over natten i en inkubator.
Telle og beregne virustiter
Ta platene dine ut av rugemaskinen og undersøk dem. Du bør se overskyede områder over hele platen der bakterier har vokst, bortsett fra små klare flekker som kalles plaketter. Disse plakkene er lapper av døde bakterier, og hver plakett representerer ett virus.
Finn en plate som har mellom 30 og 300 plaketter, og tell det nøyaktige antallet plaketter på den platen.
Ta antall plaketter inn på tallerkenen din og multipliser med 10. Hvis du regnet 157 plaketter, ville du fått 1570.
Multipliser tallet du fikk i forrige trinn med invers av tallet på fortynningsrøret. For eksempel, hvis platen du valgte var 10 ^ -5-platen, ville du multiplisert 1570 med 10 ^ 5 for å få 157000000. Dette endelige tallet er din fag-titer, og representerer antall virus per ml av den opprinnelige kulturen.