Innhold
Selv om de ikke kan sees med det blotte øye, er bakterier overalt. De finnes i mat, jord, vann, overflater i våre hjem, og i og på kroppene våre. Bakterier finnes vanligvis i blandede populasjoner. Isolering av en spesifikk bakterie fra andre bakteriearter i en gitt prøve gjør det mulig for mikrobiologer å studere dens struktur og funksjon, egenskaper som er brukt i identifikasjonen. Mikrobiologer isolerer ofte bakterier ved å bruke en av flere strekkplate-teknikker.
Verktøy
En inokuleringssløyfe brukes til å overføre mikroorganismer. Den består av en nichrome eller platinatråd med en liten, sirkulær sløyfe i den ene enden. Den andre enden er rett og glir inn i et håndtak. Engangsinokuler av plast er også tilgjengelig. Bakterier kan bare isoleres hvis de vokser. Mikrobiologer dyrker bakterier for isolering av strykeplater i grunne, runde petriskåler fylt med et solid medium, kalt agar. Agar etterligner miljøet som bakteriene naturlig vokser i. De mediefylte fatene er sterile og lokkede for å forhindre vekst av uønskede organismer. Under isolasjon av strykeplater steriliseres inokuleringssløyfen gjentatte ganger i flammen til en Bunsen-brenner.
Prinsipp
Strekkplateteknikken er den mest populære metoden for å isolere spesifikke bakterier fra en prøve som inneholder en blanding av mikroorganismer. Teknikken fortynner i hovedsak antall organismer og reduserer densiteten. Det gjør det mulig for mikrobiologer å skille og isolere individuelle bakteriekolonier. En koloni er en synlig klynge av bakterier. Alle bakteriene i en enkelt koloni stammer fra den samme bakteriecellen. Følgelig er individuelle kolonier “rene” kolonier. Den rene kolonien overføres til en annen plate for å produsere en ren kultur som består av en type bakterier.
Fremgangsmåte
Når det blir gjort ordentlig, tapper isolasjonsstreken en prøve og lar individuelle bakterieceller utvikle seg til isolerte kolonier. En mikrobiolog begynner med å sterilisere inokulasjonssløyfen i en flamme. Hun avkjøler løkken ved å berøre den til agaren, dypper deretter løkken i prøven og sprer den frem og tilbake for å dekke en del av platen. Hun steriliserer løkken, kjøler den og inokulerer en andre, tilstøtende seksjon av platen ved å dra løkken gjennom den første seksjonen flere ganger og dekke den andre seksjonen ved å bruke en sikksakkbevegelse. Dette plukker opp et lite antall bakterier fra den første delen og overfører dem til den andre delen. Antall ganger denne grunnleggende prosedyren gjentas, avhenger av strekkplate-metoden som brukes. Til tross for metoden brukes den originale prøven bare til å inokulere den første delen av platen.
Streak Plate Metode
Streak plate metoder varierer med antall agar seksjoner stripete. T-strek-metoden bruker tre seksjoner: den øvre halvdel og to like store bunnseksjoner. Det første inokulatet plasseres i den øverste halvdelen av platen. Bakterier dras fra den øverste delen til den ene av bunndelene, deretter fra den nederste delen til den andre. I kvadrantmetoden er fire seksjoner i like størrelse strekt. Den kontinuerlige strippemetoden innebærer typisk å inokulere den øverste halvdelen av platen, rotere den 180 grader og inokulere den andre halvdelen av platen uten å sterilisere løkken eller dra bakterier fra forrige seksjon.