Innhold
Biokjemi studerer molekyler som DNA, RNA og proteiner. Blotting teknikker er det forskere bruker for å skille denne typen molekyler. I celler eksisterer de som en blanding. Blotting lar forskere finne ett protein blant mange, som en nål i en høystakk. Blotting gjøres vanligvis ved å la en blanding av DNA, RNA eller protein strømme gjennom en plate av gel. Denne gelen lar små molekyler bevege seg raskere enn større. De separerte molekylene presses deretter mot en membran, noe som hjelper til med å flytte molekylene fra gelen til membranen. Molekylene klistrer seg til membranen, men holder seg på samme sted, bortsett fra hverandre, som om de fortsatt var i gelen.
Western Blot
Western blotting er en vanlig teknikk for å skille proteiner etter størrelse, men i rette kolonner. Disse parallelle kolonnene lar forskere sammenligne mengden protein over forskjellige prøver som kjøres rett ved siden av hverandre, som bowlingbaner. Hvis du for eksempel testet effekten av forskjellige mengder medikament på cellevekst, ville du behandlet fire forskjellige grupper av celler med en annen mengde medikament. Da kan du bryte cellene åpne og kjøre proteinene fra hver gruppe i separate baner på en gel. Å spre proteinene ut på denne måten lar deg se hva en økende konsentrasjon av medikamenter gjør med et visst protein.
Northern Blot
Northern blotting brukes til å oppdage RNA. Celler kan brytes åpne for å frigjøre sitt RNA. RNA fra forskjellige celletyper kan kjøres på separate baner på en gel. Gelen sprer forskjellige RNA etter størrelse. Disse pene, parallelle radene med RNA lar en forsker sammenligne hvilken celletype som har hvor mye av hvilken RNA. Denne metoden lar en forsker bestemme om celler fra en viss sykdom har mer av dette RNA eller mindre av det RNA. Northern blotting kan avsløre hvordan en sykdom fungerer på nivå med RNA-produksjon.
Sørblot
Southern blotting er den opprinnelige blotting-teknikken, som startet navnesystemet. Det ble oppfunnet av Edwin Southern. Southern blot brukes til å påvise mengden DNA i en blanding. Akkurat som med protein og RNA, kan DNA fra en celle frigjøres når den cellen brytes åpen. Southern blotting skiller DNA fra forskjellige celletyper etter størrelse. DNAet fra hver prøve er spredt i pene, parallelle baner. Individuelle deler av DNA kan oppdages ved hjelp av en radioaktiv eller fluorescerende sonde, som er designet for å bare binde seg til den delen av DNA. Energisignalet fra en radioaktiv sonde, eller lysglimtene fra et lysstoffrør, forteller forskere hvor mye av det stykke DNA som er i hver prøve.
Andre blots
De tre viktigste blotting-teknikkene - vestlige, nordlige og sørlige - er blitt modifisert på forskjellige måter for å oppdage litt forskjellige molekyler. Western blot vs Southern blot, for eksempel. oppdager henholdsvis protein og DNA. Hver modifiserte teknikk blir vanligvis utført på vanlig måte, men bruker en annen metode for å oppdage molekylet som blir spredt ut i de parallelle banene. Sørvestlige blotting oppdager molekyler av protein som er festet til DNA. Nordvestlige blots oppdager molekyler av protein som er festet til RNA. Farvestlige blotting oppdager molekyler av protein som sitter fast i andre proteiner.