Innhold
Escherichia coli, E. coli, er en bakterie som vokser i nedre tarmer hos pattedyr. Denne bakterien ble først oppdaget på slutten av 1800-tallet. Siden den gang har den hatt en lang historie med bruk i vitenskapelig forskning. Det er den mest brukte organismen innen molekylær genetikk. En del av grunnen til at E. coli ofte brukes i vitenskapelig forskning er at det er lett å dyrke på et laboratorium. Faktorene som gjør E. coli enkle å dyrke er dens enkle ernæringsbehov, raske veksthastighet og moderate krav til vedlikehold.
Steriliser inokuleringssløyfen ved å plassere den i flammen til Bunsen-brenneren. Før den nedre halvdelen av løkken gjennom flammen til den lyser rødt.
La løkken avkjøles. Du kan berøre den til den sterile agaren på platen for å sikre at den er avkjølt. Ikke plasser løkken på bordet, eller la den komme i kontakt med annet enn steril agar eller ønsket kultur nå som den er sterilisert.
Dypp løkken i E. coli-kulturen og fjern den deretter.
Åpne agarplaten og skyv løkken forsiktig frem og tilbake over overflaten på en del av agar. Pass på å ikke skrape gjennom agaren med løkken. Agaren gir næringsstoffene E. coli trenger for å vokse.
Plasser løkken i Bunsen-brennerflammen igjen for å sterilisere den. Når løkkestangen er avkjølt, berør den til en steril del av platen for å forsikre deg om at den er kjølig, og skyv deretter løkken gjennom den første streken for å lage en ny strek. Denne andre streken er en utvannet versjon av den første streken. Gjenta denne steriliserings- og glideprosessen til flere deler av agarplaten er blitt glidet over. Årsaken til at du gjør dette er slik at du senere kan velge fra enkle, klonale kolonier. Dette vil bidra til at du har minst en seksjon som har individuelle kolonier - ikke for konsentrert (som vil ha for mye vekst, og ikke tillate deg å velge fra en enkelt koloni) og ikke for fortynnet (noe som ikke vil gi noen kolonier) .
Steriliser løkken i flammen en siste gang før du legger den til side i arbeidsområdet.
Sett toppen tilbake på agarplaten. Snu platen opp ned og legg den i kuvøsatoren som er satt til 37 grader Celsius (98,6 grader Fahrenheit). Denne ideelle inkuberingstemperaturen simulerer temperaturen i menneskekroppen der E. coli er bosatt. I løpet av 24 til 48 timer vil synlige kolonier av E. coli-bakterier vises i agarplaten.