Innhold
Et spektrofotometer brukes til å bestemme konsentrasjonen av visse forbindelser, for eksempel protein, i en løsning. Generelt lyser et lys gjennom en kyvette fylt med en prøve. Mengden lys som tas opp av prøven måles. Siden forbindelser absorberer lys i forskjellige spektrale områder, må riktig bølgelengde stilles for analysen. Det er mange måter å beregne konsentrasjonen av ukjente prøver ved hjelp av spektrofotometri, men å bruke referansestandarder gir best nøyaktighet. Videre indikerer standarder også om spektrofotometeret ikke fungerer eller andre problemer med analysen.
Beregning gjennom rettlinje ligninger
Analyser referansestandarder i begynnelsen av analysen. Standarder er kjente konsentrasjoner og brukes til å kalibrere utstyr og sjekke nøyaktighet. Alle prøver skal falle innenfor arbeidsområdet for standardene. Hvis ikke, vil prøver måtte fortynnes eller konsentrasjonen av standarder økes.
Lag et spredningskart eller linjediagram med standard konsentrasjon og absorbansavlesning. Konsentrasjonen vil være på y-aksen, absorpsjonsevnen på x-aksen. For eksempel er standardene 1 ppm, 2,5 ppm og 5 ppm. Den gitte absorpsjonsevne var 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 og 5 ppm = 0,75.
Formater trendlinjen for å vise en ligning på grafen. Ligningen viser formelen y = mx + b. For eksempel, ved å bruke standardene i trinn 2, er ligningen y = .1224x + 0.1531. De fleste trendlinjer blir oppfanget ved null, men det avhenger av analysemetoden og R-kvadratverdien.
Analyser ukjente prøver og registrer absorbansavlesninger.
Bruk ligningen (y = mx + b) for å bestemme konsentrasjonen av prøver.
Forstå rett linje ligning
La “Y” være lik konsentrasjonen. Det er dette som vil bli løst for.
La "X" være lik absorpsjonsevnen til prøven. Dette er absorbansen målt ved spektrofotometeret.
Tillat at “” tilsvarer helningen og “b” for å like y-avskjæringen. Begge er gitt, men hvis trendlinjen ble tvunget gjennom 0, vil “b” være 0.
Løs for konsentrasjon. Ved å bruke eksemplet i trinn 3, erstatt "x" som en gitt absorpsjonsevne på .563. Derfor:
y = .1224 (.563) + 0,1531
y (konsentrasjon) = .222011